“昊创新、好技术！”
6163银河线路检测中心生物多年专注于深耕遗传学和基因组学等领域科研特色技术的开发，不断跟进国际先进的科研成果及技术发展，创新研发了许多特色专利技术和领域内前沿的检测服务项目，受到广大专业科研用户的认可和好评。
全外显子组是基因组全部外显子区域的总和，对于人类来说，外显子组约占基因组的1%。全外显子组测序结合外显子组富集技术和二代测序技术，可以高效快速的获得待测样品所有已知基因的外显子及其邻近区域的序列及变异。相比于全基因组测序，全外显子组测序更加经济、高效，数据解读也更加简单。
技术路线：
技术优势：
•更加直接：外显子及邻近区域是基因功能和调控直接的体现；
•更加经济：以往20个基因外显子传统测序经费就可以成就您的全外显子组梦想；
•更加高效：快速完成传统测序方法无法想象的实验任务；
•6163银河线路检测中心：每个样品免费提供“6163银河线路检测中心二代测序数据验证试剂盒”验证结果，该试剂盒包含96个位于人类基因外显子组中的中国人群高频SNP位点，用于验证二代测序基本数据的可靠性。
样本类型：完整无污染的基因组DNA
样本浓度：浓度≥ 20 ng/μL
样本纯度：OD260/280介于1.8-2.0，OD260/230 ≥ 2.0
样本需求量：总量≥ 2 μg
数据分析内容：
基本分析 1）原始数据整理、质量评估 2）序列过滤、统计富集效率 3）参考基因组比对与注释统计 4）SNV/InDel/CNV检测，注释，统计 高级分析（单基因病） 1）突变位点过滤（数据库过滤，匹配正常样本过滤） 2）依据家系信息进行遗传模式分析 3）候选致病基因功能注释 4）候选致病基因通路富集分析 5）基于家系连锁分析 6）纯合区域策略分析 高级分析（复杂疾病） 1）突变位点过滤（数据库过滤，匹配正常样本过滤） 2）依据家系信息进行遗传模式分析 3）常见变异的关联分析 4）罕见变异的基因负荷检验 5）候选致病基因功能注释 6）候选致病基因通路富集分析 |
结果展示：
图 肿瘤样本体细胞突变图谱
图 单个肿瘤样本的突变特征
Science ：LIMA1变异促进低血浆LDL胆固醇和减少肠道胆固醇吸收
在一个哈萨克族家系中部分成员具有明显更低水平LDL-C，利用全外显子测序发现、Sanger测序验证及全基因组连锁分析找到了LIMA1基因的杂合移码缺失突变LIMA1-K306fs与低水平的LDL-C相关。
在后续靶向测序的三个家系中发现了LIMA1基因的另一突变LIMA1-L25I与低水平LDL-C相关。尽管+/L25I个体的LDL-C水平不及+/K306fs的低，但是这些结果能够确定LIMA1基因的突变与低水平的LDL-C有关。
图 全外显子测序发现LIMA1-K306fs突变与更低水平的LDL-C相关
Neuron ：MYORG双等位基因突变引发常染色体隐性原发性家族性脑钙化症
首先选择了一个近亲婚配家系，对2个同胞患者（V7和V9）和一个同胞非患者（V5）进行全外显子测序，寻找纯合突变（下图家系1）。全外结果确定了5个可能的致病基因：DDX1、RABGAP1L、MYORG、ZCCHC6、TMEM2。对家系2的2个同胞患者（III4和III6）和一个同胞非患者（III5）进行全外显子测序，寻找纯合突变或者复合杂合突变（下图家系2）。全外结果确定了2个致病基因MYORG和SHISA6。
由于MYORG是唯一被确认为家系1和家系2共有的可能致病基因。研究者对剩余家系（8个隐性家系和3个遗传模式不明确的家系）的患者，进行了MYORG的目的区域测序。结果在另外4个隐性家系中确定了MYORG基因的纯合或者复合杂合突变（下图家系3-6）。
图 全外显子测序发现PFBC患者中MYORG突变
全外显子测序高分合作文章:
英文标题 | 中文标题 | 杂志 | 年份 |
Whole-exome and targeted sequencing identify ROBO1 and ROBO2 mutations as progression-related drivers in myelodysplastic syndromes | 全外显子组和靶向测序确定ROBO1和ROBO2突变是骨髓增生异常综合征的进展相关驱动因素 | Nature Communications | 2015 |
Defects in MYO5B are associated with a spectrum of previously undiagnosed low γ-glutamyltransferase cholestasis | MYO5B缺陷与先前未诊断的低γ-谷氨酰转移酶胆汁淤积症有关 | Hepatology | 2016 |
Biallelic Mutations in CFAP43 and CFAP44 Cause Male Infertility with Multiple Morphological Abnormalities of the Sperm Flagella | CFAP43和CFAP44双等位基因突变导致男性不育，并伴有精子鞭毛的多种形态异常 | The American Journal of Human Genetics | 2017 |
GUCA1A mutation causes maculopathy in a five-generation family with a wide spectrum of severity | GUCA1A突变导致五代家族黄斑病变，具有广泛的严重程度 | Genetics in medicine | 2017 |
RINT1 Bi-allelic Variations Cause Infantile-Onset Recurrent Acute Liver Failure and Skeletal Abnormalities | RINT1双等位基因变异导致婴儿期复发性急性肝衰竭和骨骼异常 | The American Journal of Human Genetics | 2019 |
1.全外显子组测序和其他目标区域靶向测序中的测序深度、捕获效率和覆盖度各是指什么？有何意义？
答：全外显子组等目标区域靶向测序中的测序深度（Sequencing Depth）一般采用平均测序深度进行衡量，是指测序获得的总碱基数目与待检测区域大小的比值；捕获效率（Capture Specificity）是指比对到待测区域的有效序列占总序列的比例，其高低不影响数据质量，只影响数据的有效比例；覆盖度（Coverage Ratio）是指待测区域被序列覆盖到的比率，是多数研究者比较关心的指标。
2.全外显子组测序和其他目标区域靶向测序过程中的假阴性和假阳性问题？
答：假阴性的主要来源包括：1）富集的探针未能覆盖所有待测区域；2）测序的不均衡性，尤其在测序深度较低时，部分区域未能被覆盖；3）由于测序采用的是随机选取，存在较大的随机波动性，杂合子的比例会偏离1:1，当偏离较大或者测序深度低的时候，就可能会被遗漏；4）GC含量的影响。
假阳性的主要来源包括：1）测序的错误率较高，在测序深度较低时，容易造成错误判断；2）当存在重复序列、STR等容易造成假阳性位点；3）由于存在同源序列，部分测序读段（reads）被错误拼接；4）测序的随机性，导致两个等位基因被测到的次数偏离1:1，造成基因型判读出错。
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