“昊创新、好技术！”
6163银河线路检测中心生物多年专注于深耕遗传学和基因组学等领域科研特色技术的开发，不断跟进国际先进的科研成果及技术发展，创新研发了许多特色专利技术和领域内前沿的检测服务项目，受到广大专业科研用户的认可和好评。
外泌体（exosome）是真核细胞向外分泌的微型囊泡，直径在30至120 nm之间，广泛存在于血液、尿液、唾液、脑脊液等体液中。血浆和外泌体类样本中的RNA除了含量较高的miRNA之外，还存在mRNA、lncRNA、circRNA等长链RNA，某些长链RNA与特定疾病具有较强的相关性，具有较高科研价值。
该服务采用成熟的技术富集不同体液来源的外泌体，对体液或者体液中的外泌体组分进行RNA抽提、文库构建以及二代测序，可同时分析同一样本中的mRNA、lncRNA、circRNA，同时可以结合miRNA测序数据进行分析，明确不同转录本之间的共表达和相互调控关系。
技术路线:
技术优势:
•Total RNA直接建库，保留了完整的RNA种类信息；
•链特异性文库，可以保留转录本的链信息，更准确检测反义RNA；
•可以联合miRNA数据，分析mRNA、lncRNA、circRNA以及miRNA的共调控关系。
样品类型：无细胞DNA或RNA污染的、血浆类或者血浆外泌体类样本来源的Total RNA
样品需求量：血浆样本Qubit microRNA检测，要求浓度 ≥ 1 ng/μL；总量 ≥ 20 ng；外泌体样本Agilent 2100 Bioanalyzer检测，要求浓度 ≥ 0.5 ng/μL；总量 ≥ 10 ng
样品RNA片段分布：Agilent 2100 Bioanalyzer检测，要求< 200 nt片段占总RNA的比例>60%，且500nt~4000nt之间无明显可见片段
数据分析内容:
mRNA标准分析 1）原始测序数据预处理； 2）数据质量过滤； 3）参考序列比对分析； 4）mRNA表达量分析； 5）mRNA差异表达分析； 6）差异基因GO和KEGG富集分析； lncRNA标准分析 1）原始测序数据预处理； 2）数据质量过滤； 3）参考序列比对分析； 4）lncRNA表达定量； 5）差异lncRNA靶基因预测； 6）差异lncRNA靶基因GO和KEGG分析； 7）新lncRNA预测； circRNA标准分析 1）原始测序数据预处理； 2）数据质量过滤； 3）参考序列比对分析； 4）circRNA识别分析； 5）circRNA表达定量； 6）circRNA差异表达分析； 7）差异circRNA来源基因的GO和KEGG富集分析； 8）差异circRNA的靶标miRNA预测； 联合分析 1）相互作用/调控关系网络分析（与miRNA-seq数据联合分析）； 2）ceRNA调控网络分析（与miRNA-seq数据联合分析）； |
结果展示:
表1 不同粒径颗粒的占比
Diameter/nm | Particles/mL | FWHM/nm | Percentage |
93.1 | 4.3E+6 | 49.5 | 98.6 |
37.8 | 5.3E+4 | 8.9 | 0.4 |
26.1 | 3.5E+4 | 2.6 | 0.2 |
433.9 | 2.4E+4 | 72.7 | 0.3 |
8.7 | 5.6E+3 | 1.6 | 0.0 |
图 ZetaView检测血浆外泌体粒径分布
左图为粒径与浓度分布图；右图为量测录像的影片截图
图 样本间差异表达的已知miRNA火山图
图 差异基因KEGG富集散点图
Molecular Cancer：外泌体circLPAR1通过METTL3-eIF3h相互作用抑制BRD4在结直肠癌诊断和肿瘤发生中的作用
为了表征结直肠癌中失调的环状RNA，对52对结直肠癌肿瘤和对照进行了RNA-Seq，观察到14221个环状RNA（图A）。在这些环状RNA中，大多数小于500 nt（图B），超过70%的环状RNA起源于蛋白质编码外显子，其次是内含子和基因间区（图C）。进一步筛选获得5个circRNAs在结直肠肿瘤组织中的表达与在对照中的表达相比显著降低（图D-E）。此外，使用exoRBase数据库对外泌体中的circRNAs进行了注释，发现了3个外泌体circRNAs（图F）。
图 组织circRNA表征及外泌体circRNA发现
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